產品介紹

NcmDH5α Competent Cell 是新賽美生物研發的用特殊化學方制備的 DH5α感受態細胞， 相比于常規方法制備的感受態細胞，其轉化不需要冰浴、熱激和孵育等步驟，最快能在 30 秒內完成轉化步驟。轉化步驟多樣性，可以實現 30 秒，5 分鐘及傳統步驟的轉化，效率可 達 108-109菌落數/ug 質粒（pUC19），是實現 DNA 克隆，文庫構建等實驗的理想產品。 

產品特色

轉化快：最快 30 秒快速轉化，不需冰浴、熱激和孵育步驟 ?

效率高：可達到 108-109 cfu/ug pUC19 DNA 

穩定性好：-70 度冰箱可保存半年時間

NcmDH5a 基因型 

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操作步驟 

（1）30 秒快速轉化 

1. 取 100ul 冰浴上融化的 NcmDH5α感受態細胞，加入目的 DNA（質?；蛘哌B接產物），輕 輕混勻。 

2.向每個離心管中加入 200ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養基（不含抗生素），輕柔地混勻。 

3. 吸取已轉化的感受態細胞加到含氨芐抗生素的 LB 瓊脂培養基上，將細胞均勻涂開。將平 板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培養。

注意：30 秒快速轉化的產物是攜帶氨芐抗性的質粒；其他抗性的質粒，開始步 驟一致，但加入 SOC 或 LB 培養基后，需在 37℃，200 rmp 的搖床上至少孵育 30 分鐘，然后再涂板。 

（2）5 分鐘轉化 

1. 取 100ul 冰浴上融化的 NcmDH5α感受態細胞，加入目的 DNA（質?；蛘哌B接產物），輕 輕混勻，在冰浴中靜置 2 分鐘。

2. 42℃水浴中熱激 30 秒，然后快速將離心管轉移至冰浴中 2 分鐘，該過程不要振蕩離心管。

3. 向每個離心管中加入 200ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養基（不含抗生素），輕柔地混勻。

4. 吸取已轉化的感受態細胞加到含氨芐抗生素的 LB 瓊脂培養基上，將細胞均勻涂開。將平 板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培養。

注意：5 分鐘快速轉化的產物是攜帶氨芐抗性的質粒；其他抗性的質粒，開始步 驟一致，但加入 SOC 或 LB 培養基后，需在 37℃，200 rmp 的搖床上至少孵育 30 分鐘，然后再涂板。

（3）傳統轉化步驟 

1. 取 100ul 冰浴上融化的 NcmDH5α感受態細胞，加入目的 DNA（質?；蛘哌B接產物），輕 輕混勻，在冰浴中靜置 30 分鐘。

2. 42℃水浴中熱激 30 秒，然后快速將離心管轉移至冰浴中 2 分鐘，該過程不要振蕩離心管。

3. 向每個離心管中加入 900ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養基（不含抗生素），輕柔地混勻后置 于 37℃，200rpm 搖床上孵育 1 小時，使細菌復蘇。

4. 根據實驗要求，吸取不同體積或者離心濃縮后的已轉化的感受態細胞加入含相應抗生素 的 LB 瓊脂培養基上，將細胞均勻涂開，將平板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培 養。 轉化示意圖：轉化迅速，最快 30 秒即可完成轉化

【1】Zhang R, Yang Y, Dong W, et al. D-mannose facilitates immunotherapy and radiotherapy of triple-negative breast cancer via degradation of PD-L1[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2022, 119(8): e2114851119.