RNAExpress Total RNA Kit
總RNA柱式提取試劑盒
貨號：Cat.No: M050 Size：50 Preps
產品介紹
RNAExpress Total RNA Kit是新賽美生物研發的新一代快速高效的總RNA提取試劑盒。通過對產品的多重優化，提高了裂解液的效果和增強了提取的靈敏度，最快能在10分鐘之內得到純度更好，質量更高的總RNA。同時對硅基質膜的改進增強了對RNA的吸附能力，每個吸附柱可處理高達50mg組織，或5X106細胞。在優化的試劑中加入了RNA保護劑，防止RNA在操作過程中發生降解，即使在室溫條件下也可以完成。提取的總RNA可用于Northern Blot，Dot Blot，PolyA篩選，體外翻譯，RNase保護分析和分子克隆。
產品特色
? 操作快速：最快10分鐘即可獲得高質量的總RNA
? 提取純度高：不含基因組DNA污染，不需DnaseI酶處理
? 產量高：最大程度地獲得樣品中的RNA
? 室溫條件下完成總RNA提取
產品組成
組成成分 | 50 Preps |
RNAExpress Lysis Buffer1 | 50 ml |
漂洗液 RWB2（RNase-Free） | 10ml (另外添加40ml無水乙醇) |
洗脫液 REB3(RNase-Free) | 3 ml |
離心吸附柱（NcmSpin Column, RNase-Free）含收集管 | 50 個 |
1.RNAExpress Lysis Buffer于4 ℃避光保存，其他溶劑及吸附柱室溫保存。
2.在漂洗液RWB中加入指定量的無水乙醇（分析純），在試劑瓶上標注出，使用完畢后要擰緊試劑瓶，防止乙醇揮發。
3.洗脫液REB中不含有EDTA，一般情況不影響下游實驗。
操作步驟
準備試劑（自備）：氯仿、無水乙醇等
1. 各種材料樣本的勻漿處理
（a）貼壁培養的細胞：吸去培養基，在培養板中直接加入適量的RNAExpress Lysis Buffer（每10cm2生長的培養細胞中加入1ml的RNAExpress Lysis Buffer），水平放置片刻，便于裂解液均勻分布細胞表面裂解，再使用移液器吹打細胞并移至收集管中。
注意：（1）收集細胞數量不要超過5X106/ml RNAExpress Lysis Buffer；
（2）RNAExpress Lysis Buffer加入量根據培養板面積確定，若是RNAExpress Lysis Buffer加入量不足，可能導致提取的RNA中有DNA污染。
（b）懸浮培養細胞：將懸浮培養的細胞和培養基一起倒入離心管中，離心收集細胞，每5X106動植物、酵母或細菌細胞加入RNAExpress Lysis Buffer。
注意：（1）部分酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理；或者需要使用溶菌酶進行裂解處理。
（2）加入RNAExpress Lysis Buffer前不要洗滌細胞，以免RNA降解。
（c）動物、植物組織：取新鮮或-70℃冷凍的動植物組織在液氮中充分剪碎研磨，將研磨成粉狀的樣品轉移至離心管中，每20-50mg組織加入1ml RNAExpress Lysis Buffer，勻漿儀進行勻漿處理。
注意：（1）要在液氮等低溫下處理樣品組織，避免RNA降解；
（2）樣品體積一般不要超過RNAExpress Lysis Buffer體積的10%。
2. 樣品在加入RNAExpress Lysis Buffer后用移液器反復吹打幾次，直至裂解液中無明顯沉淀，使樣品充分裂解。室溫靜置5min，使得蛋白質核酸復合物完全分離。
注意：可選步驟4-25℃，12,000rpm離心5 min，取上清，轉入一個新的RNase-Free的離心管中。（如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結節部分等，可加此步驟離心去除。離心得到的沉淀中包括細胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清溶液）
3. 向上述溶液中加入氯仿，每使用1ml RNAExpress Lysis Buffer加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15sec。
4. 12,000rpm, 4-25℃離心1 min，此時樣品會分為三層：紅色有機相、中間層和上層無色水相。其中RNA主要在水相中，將水相（約500ul）轉移至一個新的RNase-Free的離心管中。
5. 在得到的無色水相的離心管中，加入等體積的無水乙醇，混勻。將得到溶液轉入吸附柱NcmSpin Column中， 4-25℃ 12,000 rpm離心30sec， 若一次不能將全部溶液和混合物加入吸附柱NcmSpin Column，分兩次轉入吸附柱 NcmSpin Column中，4-25℃，12,000rpm離心30sec，棄掉收集管中的廢液。
6.向吸附柱NcmSpin Column中加入500μl漂洗液RWB（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心30sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱NcmSpin Column放入收集管中。
7. 重復操作步驟6。
8. 將吸附柱NcmSpin Column放入收集管中，12,000rpm離心2min，盡量除去漂洗液。將吸附柱置于室溫放置2min，徹底晾干
注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，如果有漂洗液殘留， 可能會影響后續的RT-PCR等實驗操作。
9. 加入30-50ul的洗脫液REB或者RNase-Free dd2HO，室溫靜置2min，4-25℃，12,000rpm離心1min。樣品保存于-70℃以備長期使用。
室溫運輸，RNAExpress Lysis Buffer于4 ℃避光保存（單獨包裝），其他溶劑及吸附柱室溫保存，2年有效。
注意事項
1. 預防RNase污染，如使用無RNase的塑料制品和槍頭，操作時要戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。
2. 加入氯仿后，一定要充分振蕩，保證RNA提取的效果
3. 使用的樣本避免反復凍融，以免影響RNA的產率和質量。
4. RNAExpress Lysis Buffer含有苯酚，具有毒性和腐蝕性，使用本制品時要穿戴防護物品，避免吸入體內、接觸皮膚、吞食等現象發生。如果不小心發生，應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。
